Test de Limulus

¿Qué es el test de Limulus?

El test de Limulus, también conocido como ensayo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL), es una prueba ampliamente utilizada en el ámbito médico y farmacéutico para la detección de endotoxinas bacterianas, que son componentes lipopolisacáridos (LPS) de la pared celular de bacterias Gram-negativas. Estas endotoxinas pueden causar reacciones inflamatorias y febriles en humanos, y su presencia en productos farmacéuticos, dispositivos médicos o soluciones parenterales puede provocar efectos adversos graves, como fiebre, shock o disfunción multiorgánica.

El test de Limulus se basa en la propiedad de los amebocitos del cangrejo herradura (Limulus polyphemus) de coagular en presencia de endotoxinas bacterianas. Los amebocitos del cangrejo herradura contienen una cascada de enzimas que, al activarse por contacto con las endotoxinas, producen una reacción de coagulación que forma un gel. La sensibilidad y especificidad del ensayo de LAL para la detección de endotoxinas lo convierten en una herramienta valiosa y confiable para garantizar la seguridad y calidad de los productos médicos y farmacéuticos.

El test de Limulus se puede realizar mediante tres técnicas diferentes: el método de gel-clot, el método cromogénico y el método turbidimétrico. Cada uno de estos métodos presenta ventajas y desventajas específicas, y su elección dependerá de las características del producto a analizar y de los requerimientos de sensibilidad y cuantificación de las endotoxinas.

El método de gel-clot es el más antiguo y simple de los tres, y consiste en la mezcla de la muestra con el lisado de amebocitos de Limulus y la incubación a 37 grados Celsius durante un tiempo determinado. La formación de un gel estable al invertir el tubo indica la presencia de endotoxinas en la muestra. Este método es cualitativo o semicuantitativo y presenta una sensibilidad moderada.

El método cromogénico, por otro lado, es un ensayo cuantitativo basado en la liberación de un sustrato cromogénico por acción de una enzima específica del lisado de amebocitos, que se activa en presencia de endotoxinas. La cantidad de endotoxinas presentes en la muestra se correlaciona con la intensidad del color desarrollado, que se mide mediante un espectrofotómetro.

El método turbidimétrico también es cuantitativo y se fundamenta en el aumento de la turbidez de la solución de lisado de amebocitos en presencia de endotoxinas, debido a la formación de partículas insolubles. La turbidez se mide mediante un espectrofotómetro y se relaciona con la concentración de endotoxinas en la muestra.

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