Nuevo protocolo para el análisis transcriptómico de las vesículas extracelulares endoteliales en aterosclerosis

Introducción
A pesar del papel clave del endotelio en la aterosclerosis, no existen técnicas directas para su análisis. El estudio de las vesículas extracelulares de origen endotelial (EEV) podría facilitar la identificación de firmas moleculares y biomarcadores tempranos de aterosclerosis. El objetivo de este trabajo fue establecer los métodos para la separación de EEV y su análisis transcriptómico.

Métodos
Adaptamos un protocolo de inmunocaptura con anticuerpos y microesferas magnéticas para la separación de las EEV del plasma de sujetos control (G1), con aterosclerosis subclínica (G2) y con enfermedad arterial periférica (G3), y modificamos un método de RNASeq para su análisis transcriptómico (n = 5/grupo). Comparamos el transcriptoma de las EEV plasmáticas con el de células endoteliales de aorta humana (TeloHAEC) e identificamos genes diferencialmente expresados (DEG) entre los grupos de pacientes, incluyendo UCP2, validado en EV plasmáticas (qPCR) e in vitro, en TeloHAECs tratadas con IL-1β, TNF-α, oxLDL e hipoxia.

Resultados
El RNASeq de las EEV plasmáticas detectó 1.667 genes enriquecidos en transcritos expresados por las TeloHAECs (NES: 1,93, ajuste p = 1,4e−73). Se identificaron 170 DEG entre los grupos G2 vs. G1 y 180 entre G3 vs. G1, de los cuales 17 se expresaron de forma similar en G2 y G3 vs. control, incluyendo UCP2. El tratamiento con IL-1β y TNF-α (10 ng/ml, p < 0,05), hipoxia (1% O2, p = 0,05) y oxLDL (100 μg/ml, p = 0,055) redujo la expresión de UCP2 en las TeloHAEC.

Conclusiones
Hemos puesto a punto un protocolo para la separación y la secuenciación de EEV que podría ser útil para la identificación de marcadores tempranos de disfunción endotelial en aterosclerosis.

CITA DEL ARTÍCULO  Clin Investig Arterioscler. 2024 Sep 12:S0214-9168(24)00079-2. doi: 10.1016/j.arteri.2024.08.003